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实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题
1、做定量PCR的话，一般不会在一个样品中加入两对引物，内参和你的目的基因都是分别进行反应的。比如说你有3个样品，每个样品需要测定目的基因A，B和内参，那就做3*3*3=27个孔就好了，3个样品，每个样品测三个基因，每一个基因做3个重复取平均。标准曲线的话，既然你已经做内参了，标准曲线就不用做了。
2、如果有标准曲线，按照标准曲线计算。一般都是相对量，则用delta delta CT *** 来计算。举例如下：对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
3、解决方案：重新纯化模板、调整基线参数、校正参比染料。 绝对定量时标准曲线线性关系不佳 原因：加样误差、标准品降解、模板浓度太高。 解决方案：提高加样体积、重新制备标准品、增加模板稀释倍数。
什么是双采双检
双采双检是指同时采集样本进行双份检测pcr是全部放到一个管子里吗，以确保结果pcr是全部放到一个管子里吗的准确性和可靠性。双采的含义： 双采指的是在检测过程中pcr是全部放到一个管子里吗，同时采集两个不同的样本或者在同一部位采集两份样本。 这种采集方式可以增加采样的数量pcr是全部放到一个管子里吗，从而提高检测的准确性。
核酸双采双检是指对于特定人群在隔离观察期间或解除隔离时pcr是全部放到一个管子里吗，采集两份鼻咽拭子样本，分别使用不同试剂，在不同机构进行检测的核酸检测 *** 。具体来说：采样方式：双采双检涉及双份采样，即采集两份鼻咽拭子样本。这有助于增加检测的准确性，减少漏诊的可能性。
双采双检是指同时采集核酸和抗体检测。这是一种全面的检测 *** ，通常用于 感染的诊断、监测和防控。以下是 双采是指采集两种样本，分别为核酸样本和血清样本。
双采双检是指同时采集两个样本进行双重检测。具体解释如下：双采： “双”：指的是两种样本。 “采”：是采集的意思。双采指的是采集同一个体的两种不同样本，例如咽拭子和鼻咽拭子，以确保采集到的样本更全面、更准确地反映个体的真实状态。双检： “双”：指的是两次或两方面。
双采双检是指在进行核酸检测时，同时采用两种不同品牌的试剂，对同一份样本进行检测。详细解释如下：双采双检的重要性 在疫情防控的关键时刻，核酸检测的准确性至关重要。双采双检作为一种更为严格的检测方式，旨在提高检测的准确性和可靠性。
核酸双采双检是一种严格的检测 *** ，主要针对无症状感染者、入境人员及密切接触者等人群。这种 *** 要求采集鼻咽拭子样本进行两次采样，并使用不同的试剂进行检测，以确保结果的准确性。通常情况下，之一次采样使用鼻拭子，第二次采样使用咽拭子。
荧光定量pcr的检测下限是多少
荧光PCR定量检测的检测下限为00copies/ml，这意味着在该浓度以下的CT-DNA水平无法被检测到，因此检测结果为阴性。你的检测结果为20copies/ml以下，意味着CT-DNA水平远低于检测下限，表明你没有感染衣原体。
pcr荧光定量检测下限25拷贝。在另外回的一组管子中，加入已知拷贝数的DNA同时扩增，每个管子中加入的数量是不同的，但是从最小数目到更大数目的这个范围涵盖了样本中DNA拷贝数。
在这个检测 *** 中，00乘以10的2次方是其检测下限。这意味着，如果样本中的 含量低于这个数值，该检测 *** 将无法准确检测出 的存在。具体来说，这个下限表示的是，当样本中 含量低于500时，该 *** 可能无法检测到 。
根据提供的数据，您的HBV DNA实时荧光定量PCR检测结果为10E+08 IU/ml，这表示 载量为10×10的8次方，即1亿个 拷贝。而该检测的更低检测下限为00E+02 IU/ml，即00×10，相当于500个 拷贝。
而00E+2表示的是500个拷贝数，这是检测仪器能够检测到的更低 复制数量。这意味着不能因为 拷贝数低于500就判断为阴性，而是说仪器只能检测到这样的更低水平。你的 拷贝数782略高于更低检测下限500，表明你的体内 复制处于较低水平，传染性相对较低。
区分乙肝大小三阳应做乙肝两对半检测。乙肝HBA-DNA检测是检查体内血液中乙肝 含量，体内 活跃和复制情况，确认是否有感染性；你的更低检测下限00E+02即500以下为正常值即阴性。你的检测结果09E+04 即10900超出下限500说明体内 有传染性。
PCR引物存放时间是多少
1、关于PCR引物的存放时间，这取决于引物的状态。如果引物以粉末形式存放，在-20度的条件下，可以保存数年。然而，一旦引物被稀释成液体，其存放时间就会缩短，通常情况下，可以保存大约一年左右，有时甚至更久。需要注意的是，引物的实际存放时间还会受到实验室冰箱使用情况的影响。
2、PCR引物的存放时间取决于其状态和储存条件。引物状态：未经修饰的DNA引物，无论是干粉形式还是存于TE或无核酸酶水中，其稳定性都依赖于储存温度和介质。在-20℃的条件下，干粉引物可以稳定保存2年或更长时间。然而，一旦引物被稀释成液体状态，其保存期限会相对缩短。
3、PCR引物存放时间，这要看是什么状态，要是粉末的话，在-20度可以存放好几年；要是已经把引物稀释成液体状态的话，存放时间就要短一点了，但也可以存放一年左右的时间，甚至更长。
4、PCR的产物保存时间不长的 一般认为是48小时之内使用较为妥当，可以考虑真空干燥然后冻起来，保存一两年都没问题。
5、）荧光探针必须避光保存。2）干品可于-80℃保存一年以上，无条件时可于-20℃保存。3）强烈建议用RNase-free的TE buffer(pH 0)溶解探针，这样得到的探针溶液更稳定，保存时间更长。4）可将探针配制成100 pmol/μl的储备液，分装成几份于-20 ℃保存。
6、引物的稳定性依赖于储存条件。应将干粉储存在-20℃。以大于10μM 浓度溶于TE 的引物在-20℃可以稳定保存6个月，但在室温（15℃到30℃）仅能保存不到1 周。 干粉引物可以在-20℃保存至少1 年，在室温（15℃到30℃）最多可以保存2个月。所以根据其特性，干粉经高温烘干会失效，不能用了。
我想问做PCR扩增应该注意的事项?
1、在进行PCR扩增实验时，务必佩戴口罩和一次性手套，并尽量在低温环境下操作。此外，在提取上清液时需特别小心，避免扰动靠近沉淀的部分，以防蛋白质污染，影响比值。 加入氯仿前的匀浆液可以在-70℃下保存一个月以上，RNA沉淀在70%乙醇中可以在4℃下保存一周，或在-20℃下保存一年。
2、操作过程中要戴一次性手套，并经常换手套。更好把要直接接触样品的东西都用DEPC水处理一下， 头盒插好 头后，加入1-2ml的0.1%DEPC水，在灭菌就行了；现在有进口的RNASE FREE的 头买，直接用不用处理的。
3、在进行PCR实验时，还需特别注意防止气溶胶污染，因为气溶胶污染可能导致实验结果出现假阳性。此外，要避免引物设计不当导致的非特异性扩增，确保引物的特异性和扩增效率。总的来说，PCR实验注意事项涉及实验前、中、后的多个环节，只有严格遵循操作规程和注意事项，才能保证实验的准确性和可靠性。
4、延伸4min，最后在4℃暂停。在实验操作中，注意以下事项：引物设计要具有特异性，避免非特异性扩增；分装引物时避免多次冻融；确保所有反应成分齐全，操作时佩戴手套，低温操作；根据引物特性和PCR条件设定循环条件；分析PCR产物时，需注意可能的问题，如拖带、非特异带、无DNA带或弱带的出现。
5、最后，还需要注意PCR循环数的设定，过多的循环数可能导致非特异性扩增，而过少的循环数可能导致目标片段的丢失。在进行PCR反应时，还需要关注实验室的环境条件。实验室的温度、湿度以及污染情况都会影响PCR反应的稳定性。此外，操作人员的技能和经验也是保证PCR反应成功的重要因素。
6、注意：上述程序仅供参考和学习，具体实验应根据实际情况调整。
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